药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
低速离心机分离技术是根据颗粒在一个实用离心场合中的状态而发展起来的新技术。不同密度、大小或形状的颗粒在不同速度的离心场合中沉降,所以一个大体是球形非均一的混合物,可以用离心的方法加以分离,台式低速离心机是为了进一步研究生物化学、分离大量的物质。例如收集细胞、分离血浆,从这些预纯化的制剂中分离DNA和蛋白质分子,并可分离出病毒以及大规模大肠、严细胞成份、白微粒等。
低速离心机转头应固定在准确位置,固定螺丝应拧紧,转头等配件是否有裂缝及腐蚀,地线接触情况。必须使用独立的插座,保证电压稳定;如用户电压不稳定,必须连接稳压电源,以免损坏离心机;台式低速离心机要放在结实、稳固、水平的台面上,机箱周围留有一定空间,保持通风良好。每次使用完后,应打开盖子,擦去冷凝水,然后自然晾干;离心前后,转头必须轻轻垂直放下或提起,避免碰撞转轴和转头。离心机转头,吊篮,套管等,使用完毕后,应擦干,并分别放。
低速离心机离心过程中发生玻璃管破碎,应把离心机腔体,套管等处碎屑清除干净,否则会损伤离心机。应定期用吸尘器清除位于离心机后部散热片上的灰尘。若发现低速离心机的砖头有被腐蚀及裂痕,应立即更换。并且必须定期用的上光油对转子、吊篮及套管等进行维护,以避免腐蚀,用润滑油对轴、吊篮耳等部位进行润滑。
低速离心机良好的使用可以避免很多事故发生,比如:
装样找平衡
离心机在设计与制造时,对转子的加工误差带来的不平衡,已作了动平衡试验的补救,但凡是离心机,都有其答应的装样不平衡量,尽量找好平衡后离心,对离心机的寿命有好处。
清理离心腔内的积水
离心机运转时使用制冷,由于空气的水分,在离心腔内结霜,停机后霜化为水。大部分国外的低速大容量离心机,没有排水孔,离心腔中水愈积愈多。此时,用户应自行拆下转子,清理积水。在重新安装转子时,一定要装好,避免失事故。
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。