离心技术的原理是物体在匀速圆周运动时受到一个外向的离心力,将样品放入离心机转子的离心管内,样品液就随离心管做匀速圆周运动,产生了一个向外的离心力。
区带转子避免了用离心管所引起的壁效应(Walleffects)和干扰,提高了分辨率。
垂直转子(Vertical-Tube-Rotor):
主要用于样品在短时间作密度梯度离心。甩平转子分离粒子位移距离长,分辨能力高,分离后组分的区带较宽,便于回收,但所需时间长,垂直转子分离的粒子位移距离等于离心管直径。转子转动前,管内密度梯度溶液的密度是沿重力方向变化,转动后,溶液的密度逐渐改变为离心力方向(水平方向)变化,离心结束后,溶液的密度变化方向因重力作用又沿铅垂方向变化,形成铅垂方向的密度梯度,由于离心管是垂直放置,所以溶液粒子位移的距离等于离心管的直径。离心时间短,离心后样品组分的区带较宽,但因离心时间短,粒子得不到充分分离,将会失去一些组分,又因区带与梯度介质的接触面大,易于扩散,停机后密度重新定向,易于混合,所以作区带离心的效果,垂直转子不于甩平转子。
离心机转子的转速跟转子的材料和强度有关,一般采用强度好、重量轻的超硬铝合金(LC4),超速离心机采用钛合金(TiC4)。一般来说,对同一离心机重量轻、容量小的转子转速要高,反之转速要低。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5ml10%三(丙酮配制,含10mM即0.07%β-),混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000r/min离心15min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,(有必要再用80%丙酮(含10mMβ-所得沉淀低温冷冻真空抽干。
按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5M尿素,5mM碳酸钾,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫苏糖醇),2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc,pH3.5-10),6%TritonX-100],37℃温育30min,期间搅动几次,28度(温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min,离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳。或者-70度保存
低温高速离心机
低温高速离心机美观实用,一般为微机控制,触摸面板,数字显示。这种离心机的离心腔内温度可降至零摄氏度以下,多用于收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等,常见于各类生化实验室。
离心机根据转子转速(每分钟转数,以r/min表示)的大小,可分为普通离心机、高速离心机和超速离心机三类。
这里主要介绍塑料离心管:塑料离心管都有管盖,离心前管盖必需盖严,倒置不漏液。管盖有三种作用:
①避免样品外泄,用于有放射性或强腐蚀性的样品时;
②避免样品挥发;
③支持离心管,避免离心管变形。塑料离心管的资料、化学稳定性和物理特性如下:
1、 塑料离心管资料
在一些实验中,一些被测物经分离、净化后,样液的量比较多,被测定成分含量极其微小。例如痕量测定实验,在测定前需要浓缩样液,提高浓度,这样能提高分析的灵敏度。
但是存在于这些被测物中的污染物存在性质不稳定,易氧化分解,浓缩过程一定应注意防止氧化分解,尤其是在浓缩至近干的时候,极易发生氧化、分解,这时需要在氮气流保护下进行浓缩,常用的浓缩方法有以下几种:
一、减压浓缩法 有些待测组分对热不稳定,在较高温度下容易分解,采用减压浓缩,降低了溶剂的沸点,既可迅速浓缩至所需体积,又可避免被测物分解。
常用的减压浓缩装置为全玻减压浓缩器,又称K-D浓缩器,这种仪器是一种常用的减压蒸馏装置,此法具有浓缩温度低、速度快、损失少以及容易控制所需要体积的特点,适合对热不稳定被测物提取液的浓缩,特别适用于农药残留分析中样品溶液的浓缩。此外,还可用作溶剂的净化蒸馏之用。
问:离心机的故障和排除方法有哪些?
答:你好!我有过医用离心机的经验。
1,显示异常:接线异常、松动、错误、原材料问题;
2,电机异常:电机本身故障(原材料)、驱动器接线错误或者电源线松动、由于电机加减速太快导致反电动势引起的电压回流至开关电源造成断电,过段时间恢复。
3,保险由于启动或者突然停止顶啊流过大烧断。