洁净室气流组织
送风气流应以较短距离,不受污染地直接送到工作区,并且尽量覆盖工作区,使污染物在扩散之前被携带到回风口。尽量减少涡流,避免把工作区以外的污染物带入工作区。尽量控制气流的上升,防止造成二次污染。工作区的气流尽量均匀。主要分为单向流洁净室(层流)及非单向流洁净室(乱流)。
无菌室的设置
无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点:
(1)无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。内间面积2×2.5=5m2,外间面积1×2=2m2,高以2.5m以下为宜,都应有天花板。
(2)内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台较远的位置上;外间的门较好也用拉门,要设在距内间较远的位置上。
(3)在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm,内外都挂对拉的窗扇。
(4)无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台较远的位置),较好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。
(5) 无菌室杀菌前,应将所有物品置于操作之部位(待检物例外),然后打开紫外灯杀菌30分钟,时间一到,关闭紫外灯待用。
(6) 进入无菌室前,必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
(7) 操作应严格按照无菌操作规定进行,操作中少说话,不喧哗,以保持环境的无菌状态。
器材及场所的灭菌消毒
微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理,不同的对象采用不同的处理方法。
1. 高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等,置高压杀菌锅内,一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理。
2. 火焰灭菌: 接种针、接种环等可直接火焰灭菌。
3. 高温干燥灭菌: 各种玻璃器皿、注射器、吸管等,置于燥箱中160℃灭菌2小时。
4. 一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌,必须用其他方法进行消毒处理,采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒,工作人员的手也用此法进行消毒。
5. 空气的消毒: 开启紫外灯照射30―60分钟 即可。
准备工作
1. 先进行无菌室空间的消毒,开启紫外灯30―60分钟。
2. 检验用的有关器材, 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒。
3. 操作人员必须将手清洗消毒,穿戴好无菌工作衣、帽和鞋,才能进入无菌室。
4. 进入无菌室后再一次消毒手部,然后才进行检验操作。
6、洁净室风量及气流组织
6.1、洁净室风量
洁净室风量包括送风量、回风量、排风量、新风量。
风量大小取决于洁净室等级及温湿度要求。洁净室风量根据发尘量**洁净度的风量及热湿负荷所需要的风量取其大者,往往维持洁净度的风量远大于热温湿度所需要的风量。
新风量根据人员需求风量(30~40m3/h)、维持正压风量、排风量等综合考虑。